Морфологическое исследование мазков крови

Техника приготовления мазка на предметном стекле

Используются чистые предметные обезжиренные стекла желательно толщиной 1 мм (фирма «Гем»).

Капля крови помещается в середине стекла в 1-2 см от одного из концов.

Шлифованное стекло, которым будет сделан мазок, ставят на предметное стекло под углом 30-45 градусов на 1-2 мм перед каплей и двигают его немного назад, чтобы стекло соприкоснулось с каплей крови и капля растеклась по углу между двумя стеклами.

Далее быстро проводят движение вперед по предметному шлифованным стеклом, которое должно быть уже предметного или специальным пластиковым шпателем (фирма "Гем", «А/О ЮНИМЕД»), позволяющим получить монослойный мазок практически на всем его протяжении.

Мазок должен иметь длину 3-4 см. Не следует сильно нажимать на стекло, так как при этом травмируются форменные элементы крови.

Мазки высушивают на воздухе и маркируют.

Правильно выполненный высохший мазок должен быть тонким, желтоватого цвета, располагаться на 1-1,5 см от краев и оканчиваться «метелочкой».

В толстых (густо-розового цвета) мазках морфология клеток плохо различима. После окрашивания эритроциты при микроскопии должны располагаться отдельно друг от друга в виде монослоя.

Существует 2 типа автоматических приборов для производства равномерных мазков крови, в основе которых используется механическое распределение клеток или центрифугирование (Cytospin фирмы Shandon). Цитоцентрифуга концентрирует клетки на небольшой площади и такие мазки используют для изучения клеток в низких концентрациях, например, в спинномозговой жидкости. В современных гематологических анализаторах имеется устройство для автоматического приготовления мазков с последующей их фиксацией и окрашиванием, что еще больше сокращает время приготовления препаратов и обеспечивает постоянство характеристик окраски. Данные приборы требуют стандартных стекол размером 26x76x1 (фирма «Гем)

Окраска мазков крови

Наиболее часто применяют окраску

• по Романовском
• по Нохту 
• по Паппенгейму-Крюкову

Существуют автоматические устройства для приготовления и окраски мазков, которые позволяют стандартизировать условия и повысить качество препаратов.

В настоящее время предлагается широкий спектр высококачественных красителей (фирма "Гем", НПФ "Абрис+"), удобные в применении и дающие хорошие результаты при окраске мазков. Можно использовать наборы для быстрого окрашивания мазков крови в течение 20-30 секунд (фирма "Гем").

Автоматическая фиксация и окраска мазков может быть осуществлена с помощью специальных устройств: "Гема-Тек" (США), "ПОМК-1" (Россия), в которые загружают нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование фиксатора-красителя и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску мазков.

Исследование мазка крови.

Окрашенный препарат крови должен сначала быть просмотрен с помощью иммерсионного объектива (90х) и окуляра 7х или 10х. Использование ЮОх увеличения позволяет оценить соответствующее клеточное распределение, ориентировочное количество лейкоцитов в мазке. При исследовании эритроцитов важно выявить отклонения в их размере, форме, степени насыщения и распределении гемоглобина, а также наличие включений. Затем оценивается число и морфология тромбоцитов, а также морфология и дифференциальный подсчет лейкоцитов.

Дифференциальный подсчет лейкоцитов

Подсчет лейкоцитарной формулы заключается в регистрации всех встречающихся в поле зрения лейкоцитов раздельно по их принадлежности к тем или иным росткам.

В мазке крови распределение форменных элементов происходит неравномерно, так как лейкоциты различаются по своим физическим свойствам (размеры, удельная масса, упругость и т.д.). По краям препарата чаще встречаются нейтрофилы, моноциты, эозинофилы, в середине - лимфоциты. Поэтому передвигать стекло надо в определенном порядке. Считают несколько полей зрения вдоль края, затем возвращаются к центру и так далее по зубчатой траектории.

При подсчете лейкоцитарной формулы используют лабораторные клавишные счетчики. Подсчитывают 100 клеток с последующим выведением процентного, а при необходимости абсолютного количества клеток, исходя из общего количества лейкоцитов. В случае патологии анализируют не менее 200 клеток, при этом особое внимание обращают на качественные изменения в эритроцитах, тромбоцитах и морфологию лейкоцитов.

При визуальном дифференциальном подсчете имеются 3 главных источника ошибок:

• неравномерное распределение клеток в препарате,
• нераспознавание клеток
• статистика.

В обычном мазке лейкоциты в большем количестве располагаются в области "щеточки" и по краям препарата, а не в центре. Кроме того, там же располагаются и самые крупные клетки. Плохо приготовленный или плохо фиксированный и окрашенный мазок - основная причина ошибок, связанных с распознаванием клеток.

Наибольшие ошибки, однако, встречаются в связи с тем, что подсчитывается малое количество клеток в образце.